Resumo O osteossarcoma é uma neoplasia mesenquimal associada à alta mortalidade em cães e humanos. O pequi (Caryocar brasiliense, Camb.) é nativo do Cerrado, bioma rico em biodiversidade predominante na região Centro-Oeste do Brasil. Embora esta planta seja frequentemente utilizada na medicina popular, as propriedades farmacológicas da casca do pequi ainda são pouco conhecidas. Este estudo teve como objetivo determinar a atividade citotóxica do extrato etanólico de cascas de pequi recicladas em células de osteossarcoma canino. As células foram cultivadas e tratadas com concentrações finais de extrato de zero, 0,029 µg/µL, 0,29 µg/µL e 2,91 µg/µL por 24, 48 ou 72 horas. As células foram submetidas a ensaio de viabilidade celular pelos métodos de exclusão de azul de tripano da redução de tetrazólio para determinar a IC50, ao ensaio de sobrevivência celular para calcular a fração de sobrevivência e à dupla marcação com anexina V e iodeto de propídio para determinar o tipo de morte celular. O extrato etanólico de casca de pequi na concentração de 2,91 µg/µL apresentou a maior inibição do crescimento de células de osteossarcoma, com redução de 71,80% no crescimento em relação ao controle. A IC50 média foi de 155,2 μg/mL em 72 horas. O crescimento celular em 72 horas foi 3,33% menor nas células tratadas com 2,91 µg/µL de extrato. A apoptose foi o tipo predominante de morte celular em células tratadas com 2,91 µg/µL de extrato. Esses resultados demonstram que o extrato etanólico de cascas de pequi recicladas promove apoptose em células de osteossarcoma canino.

Abstract Osteosarcoma is a mesenchymal cancer associated with high mortality in dogs and in humans. The biodiversity-rich Cerrado, the predominant biome in the Midwest region of Brazil, is native to locally appreciated fruits such as pequi (Caryocar brasiliense, Camb). Although this plant has been frequently used in folk medicine, the pharmacological properties of pequi fruit shells have not been fully evaluated. Thus, this study aimed to determine the cytotoxic activity of ethanol extract of recycled pequi shells on canine osteosarcoma cells in vitro. Cells were cultured and treated with final extract concentrations of 0, 0.029 µg/µL, 0.29 µg/µL, and 2.91 µg/µL for 24, 48, or 72 hours. Cell viability assay using trypan blue exclusion method and tetrazolium reduction method, cell survival assay, and double labeling with annexin V and propidium iodide were performed in the treated osteosarcoma cells. These allowed the determination of IC50, survival fraction, and type of cell death, respectively. Pequi shell ethanol extract at a concentration of 2.91 µg/µL showed the greatest inhibition of osteosarcoma cell growth in vitro, resulting in a 71.80% decrease in growth compared to the control. The mean IC50 was 155.2 μg/mL at 72 hours. The calculated survival fractions showed that cell growth at 72 hours was 3.33% lower in cells treated with 2.91 µg/µL extract. Results from the double labeling experiment suggest that apoptosis was the predominant type of cell death in cells treated with 2.91 µg/µL extract. These results demonstrate that ethanol extract of recycled pequi shells promotes apoptosis in canine osteosarcoma cells.

RESUMO Apesar das condições edafoclimáticas favoráveis para a produção de abacate no Brasil, doenças como a podridão da raiz causada pelo patógeno Phytophthora cinnamomi, comprometem a cultura. Visando o manejo da podridão radicular na cultura do abacateiro, o presente estudo teve como objetivo avaliar o controle químico e biológico com isolados de Trichoderma spp. e Pseudomonas fluorescens. Para isso foram conduzidos três ensaios, em que foram avaliados (i) a inibição micelial de P. cinnamomi por isolados de Trichoderma spp. e P. fluorescens provenientes de diferentes cultivos; (ii) efeito de metabólitos autoclavados e não autoclavados de P. fluorescens e (iii) o tratamento químico e biológico de mudas de abacateiro para o controle da podridão de raízes em condições de campo. Os isolados de Trichoderma spp. provenientes de solo de cultivo de milho e os produtos comerciais formulados com Trichoderma apresentaram antagonismo superior (p<0,05) ao patógeno P. cinnamomi nos testes “in vitro”. Da mesma forma, metabólitos não autoclavados de P. fluorescens apresentaram potencial antagônico para o controle de P. cinnamomi. Em condições de campo, o fungicida metalaxil e os bioagentes apresentaram efetividade no controle de P. cinnamomi e maior comprimento e massa de raízes. Os resultados demonstraram o potencial do controle biológico da podridão radicular do abacateiro com Trichoderma spp. e P. fluorescens.

ABSTRACT Despite the favorable edaphoclimatic conditions for avocado production in Brazil, diseases such as root rot caused by the pathogen Phytophthora cinnamomi compromise the crop. With the aim of managing root rot in avocado, the present study aimed to evaluate chemical and biological control with isolates of Trichoderma spp. and Pseudomonas fluorescens. Thus, three assays were conducted to assess: (i) mycelial inhibition of P. cinnamomi by isolates of Trichoderma spp. and P. fluorescens from different crop systems; (ii) effect of autoclaved and non-autoclaved metabolites of P. fluorescens, and (iii) chemical or biological treatment of avocado seedlings on the control of root rot under field conditions. The isolates of Trichoderma spp. from maize cultivation soil and the commercial products formulated with Trichoderma presented greater antagonism (p <0.05) to the pathogen P. cinnamomi in the in vitro tests. Similarly, non-autoclaved metabolites of P. fluorescens presented antagonistic potential to control P. cinnamomi. Under field conditions, the fungicide metalaxyl and the bioagents showed effectiveness in controlling P. cinnamomi, as well as greater root length and mass. Results demonstrated potential for the biological control of avocado root rot with Trichoderma spp. and P. fluorescens.

RESUMO A redução na eficiência de fungicidas sintéticos está associada a seleção de indivíduos que apresentam alterações genéticas que conferem resistência aos ingredientes ativos. A sinalização de variações na frequência de indivíduos resistentes nas populações de fungos pode ser quantificada através da concentração efetiva 50 (CE50). O objetivo do trabalho foi avaliar a sensibilidade de populações de Phakopsora pachyrhizi coletadas durante a safra 2017/18 em diferentes regiões produtoras de soja ao i.a protioconazol (IDM), através da concentração efetiva que resulta em 50% de eficiência de controle (CE50). Folíolos de soja foram tratados com o i.a nas concentrações zero; 0,0625; 0,125; 0,25; 0,5; 1; 2; 4; 8 e 16 mg L-1 e inoculados com uredósporos de P. pachyrhizi provenientes de 17 localidades distribuídas no Brasil e Paraguai. Os folíolos inoculados foram mantidos em placas de Petri plásticas de 15cm de diâmetro com papel filtro umedecido e incubadas em câmaras de crescimento a 23o C ±2o C. A severidade da doença foi avaliada 15 dias após a inoculação. Através do ajuste log-logístico foi estimada a concentração efetiva que apresenta 50% de eficiência de controle (CE50) para cada população. Foi observada variação na sensibilidade entre as populações do fungo P. pachyrhizi ao fungicida protioconazol, com valores de CE50 variando de 0,05 mg L-1 a 1,04 mg L-1 com média e mediana de 0,35 mg L-1. De acordo com os resultados obtidos houve alteração da sensibilidade das populações de P. pachyrhizi ao fungicida protioconazol conforme o local de origem das populações do fungo.

ABSTRACT Reduced efficiency of synthetic fungicides is associated with the selection of individuals presenting genetic alterations that provide resistance to active ingredients. Signs of variations in the frequency of resistant individuals among fungal populations can be quantified based on the effective concentration 50 (CE50). The objective of this study was to evaluate the sensitivity to prothioconazole (DMI) by populations of Phakopsora pachyrhizi collected during the 2017/18 harvest from different soybean producing regions, based on the effective concentration that results in 50% control efficiency (CE50). Soybean leaflets were treated with a.i. at the concentrations zero; 0.0625; 0.125; 0.25; 0.5; 1; 2; 4; 8 and 16 mg L-1 and inoculated with P. pachyrhizi uredospores from 17 localities distributed in Brazil and Paraguay. The inoculated leaflets were kept in 15cm-diameter plastic Petri dishes containing moistened filter paper and incubated in growth chambers at 23 ± 2°C. The disease severity was evaluated 15 days after inoculation. Log-logistic adjustment was employed to estimate the effective concentration that had 50% control efficiency (CE50) for each population. There was variation in the sensitivity of P. pachyrhizi populations to the fungicide prothioconazole, and CE50 values ranged from 0.05 mg L-1 to 1.04 mg L-1 with mean and median values of 0.35 mg L-1. According to the obtained results, sensitivity of P. pachyrhizi to the fungicide prothioconazole varied with the origin of the fungal populations.

RESUMO: O osteossarcoma é o tumor maligno das células ósseas primitivas, com alta incidência em cães e humanos. A necessidade de medicamentos mais efetivos, com menor consequência adversa, tem gerado esforços para o desenvolvimento de agentes quimioterápicos compostos por plantas e outras fontes naturais. O objetivo deste estudo foi verificar os efeitos citotóxicos da β lapachona, um composto presente na serragem da madeira do ipê, sobre células de osteossarcoma canino subcultivadas e submetidas ao tratamento, de acordo com as diferentes concentrações (0,1μm; 0,3μm e 1,0μm) e tempo de exposição (24h, 48h e 72h). Os resultados foram obtidos por meio dos métodos de exclusão do corante azul de Tripan e de redução do tetrazólio, além dos ensaios de sobrevivência celular, de dupla marcação com Anexina V-FITC e Iodeto de Propídio, de marcação com o corante JC-1 e pela análise da cinética do ciclo celular. O grupo tratado com 0,3μm de β lapachona apresentou melhor regressão da viabilidade celular (80,27%, 24h; 47,41%, 48h e 35,19%, 72h) e maior progressão da citotoxicidade (19,73%, 24h; 52,59%, 48h e 64,81%, 72h). O menor IC50 (0,180μm) ocorreu no grupo tratado por 72 horas. O crescimento celular após o tratamento foi menor, de acordo com o aumento da concentração e tempo de exposição, apresentando 0,50% de fração de sobrevivência na concentração de 1,0μm. A apoptose inicial foi o tipo de morte celular mais frequente em todos os grupos, menor no grupo de 24 horas tratado com 0,1μm (4,26%) e maior no grupo de 72 horas tratado com 1,0μm (85,89%). A despolarização mitocondrial ocorreu de maneira dose dependente, indicando a ocorrência de apoptose intrínseca. A β lapachona possui efeitos citotóxicos em células de osteossarcoma canino, induz apoptose e promove o bloqueio do ciclo celular na fase G0/G1.

ABSTRACT: Osteosarcoma is a malignant tumor of primitive bone cells with a high incidence in dogs and humans. The need for more effective drugs with less adverse consequences has pushed the development of chemotherapeutic agents from plants and other natural sources. The aim of this study was to verify the cytotoxic effects of β-lapachone, a compound present in the sawdust of Tabebuia sp. (popularly known as ipê) wood, on canine osteosarcoma cells subcultured and treated in different concentrations (0.1μm, 0.3μm e 1.0μm) and exposure times (24h, 48h e 72h). Results were obtained through Trypan blue dye exclusion, tetrazolium reducing method, cell survival assay, Annexin V-FITC and Propidium Iodine labeling, JC-1 dye labeling and cell cycle kinetics e analysis. The group treated with 0.3μm β-lapachone presented higher decrease in cell viability (80.27%, 24h, 47.41%, 48h and 35.19%, 72h) and greater progression of cytotoxicity (19.73%, 24h, 52.59%, 48h and 64.81%, 72h). The lower IC50 (0.180μm) was verified in the group treated for 72 hours. Cell growth after treatment decreased as concentration and time of exposure increased, with 0.50% survival fraction at the concentration of 1.0μm. Initial apoptosis was the most frequent type of cell death in all groups, reaching bottom in the 24-hour group treated with 0.1μm (4.26%) and peaking in the 72-hour group treated with 1.0μm (85.89%). Mitochondrial depolarization demonstrated a dose-dependent phenomenon, indicating the intrinsic apoptosis. Cell growth inhibition by blocking cell cycle in the G0/G1 phase related to the exposure the time. β-lapachone is cytotoxic for canine osteosarcoma cells, induces apoptosis and promotes cell cycle arrest in G0/G1 phase.

Este estudo objetivou avaliar a biologia larval de Heliothis virescens em soja MON 87701 x MON 89788 e na soja convencional não Bt. De forma geral, o impacto da soja MON 87701 x MON 89788 sobre H. virescens foi evidenciado em todos os bioensaios, com 100% de mortalidade larval, independente da estrutura (folha ou vagem) consumida pela praga. As lagartas pequenas (1° e 3° ínstar) demonstraram que são incapazes de danificarem vagens verdes de soja, independente de ser Bt ou não Bt. As lagartas grandes (5° ínstar) que se alimentaram de soja MON 87701 x MON 89788 consumiram três vezes menos soja comparativamente às desenvolvidas em soja não Bt, além de resultar em menor longevidade e viabilidade larval. No último experimento, as lagartas grandes de H. virescens ocasionaram injúrias na ponteira da soja convencional, verificando-se que a praga se desloca rapidamente para esta região da planta. Entretanto, a soja MON 87701 x MON 89788 é uma eficiente ferramenta no controle de H. virescens.

This study aimed to evaluate the larval biology of Heliothis virescens in soybean MON 87701 x MON 89788 and its isogenic non-Bt. In general, the impact of soybean MON 87701 x MON 89788 on H. virescens was evidenced in all bioassays, 100% larval mortality, independent of the structure (leaf or pod) consumed by the pest. The small larvae (1st and 3rdinstar) demonstrated that they were unable to damage fresh pods of soybean, regardless of whether Bt or not Bt. The large larvae (5th instar) fed on soybean MON 87701 x MON 89788 soybeans consumed three times less compared to larvae fed on non-Bt soybeans, and resulted in reduced longevity and larval survival. When soybean plants were infested with 5th instar larvae, H. virescens caused injuries in the steams of the conventional soybean. It was recorded that the insects moves quickly to this region of the plant. However the soybean MON 87701 x MON 89788 was an effective tool in controlling H. virescens.